GB 5009.305-2025 食品安全国家标准 食品中双酚A、双酚F和双酚S的测定

中华人民共和国国家标准
GB5009.305—2025
食品安全国家标准
食品中双酚A、双酚F和双酚S的测定
2025-03-16发布2025-09-16实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会
国家市场监督管理总局发布
食品安全国家标准
食品中双酚A、双酚F和双酚S的测定
1 范围
本标准规定了食品中双酚A、双酚F和双酚S的液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于肉及肉制品、乳及乳制品、水产品、谷物、蛋类、蔬菜、水果、饮料、婴幼儿配方食品和婴
幼儿谷类辅助食品中双酚A、双酚F和双酚S的测定。
2 原理
试样中的双酚A、双酚F和双酚S,用乙腈或甲醇-水溶液提取,免疫亲和柱净化,液相色谱-串联质
谱法测定,内标法定量。
3 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 乙腈(CH3CN):色谱纯。
3.1.2 甲醇(CH3OH):色谱纯。
3.1.3 氯化钠(NaCl)。
3.1.4 磷酸氢二钠(Na2HPO4)。
3.1.5 磷酸二氢钾(KH2PO4)。
3.1.6 氯化钾(KCl)。
3.1.7 盐酸(HCl):优级纯。
3.2 试剂配制
3.2.1 盐酸溶液(10+90):量取10mL盐酸,加入90mL水中,混匀。
3.2.2 磷酸盐缓冲溶液(以下简称PBS):称取8.0g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g
氯化钾,用900mL水溶解,用盐酸溶液(10+90)调节pH 至7.4±0.1,再加水稀释至1000mL。
3.2.3 甲醇-水溶液(80+20):量取甲醇80mL,加入水20mL,混匀。
3.2.4 甲醇-水溶液(40+60):量取甲醇40mL,加入水60mL,混匀。
3.3 标准品
3.3.1 双酚A 标准品(C15H16O2,CAS:80-05-7):纯度≥99.0%,或经国家认证并授予标准物质证书的
标准品。
3.3.2 双酚F标准品(C13H12O2,CAS:620-92-8):纯度≥99.0%,或经国家认证并授予标准物质证书的
标准品。
1
GB5009.305—2025
3.3.3 双酚S标准品(C12H10O4S,CAS:80-09-1):纯度≥99.0%,或经国家认证并授予标准物质证书的
标准品。
3.3.4 13C12-双酚A 同位素内标(C313C12H16O2,CAS:263261-65-0):100mg/L,或纯度≥98.0%的固体
标准品。
3.3.5 13C12-双酚F同位素内标(C13C12H12O2):100mg/L,或纯度≥98.0%的固体标准品。
3.3.6 13C12-双酚S同位素内标(13C12H10O4S):100mg/L,或纯度≥98.0%的固体标准品。
3.4 标准溶液配制
3.4.1 标准储备液(100mg/L):准确称取双酚A、双酚F和双酚S标准品各10mg(精确至0.1mg),分
别用甲醇溶解并定容至100mL,混匀。将溶液转移至棕色玻璃试剂瓶中,-18℃下避光保存,有效期为
12个月。
3.4.2 标准中间液(1mg/L):准确吸取双酚A、双酚F和双酚S的标准储备液各0.10mL,分别置于
10mL 容量瓶中,用甲醇定容至刻度,混匀。将溶液转移至棕色玻璃试剂瓶中,-18 ℃下避光保存,有
效期为6个月。
3.4.3 标准混合使用液(双酚A 和双酚F:100μg/L;双酚S:10μg/L):准确吸取双酚A 和双酚F的
标准中间液各1.00mL、双酚S的标准中间液0.10mL,置于10mL容量瓶中,用甲醇-水溶液(40+60)
定容至刻度,混匀。临用现配。
3.4.4 同位素内标中间液(1mg/L):准确吸取13C12-双酚A 标准溶液、13C12-双酚F标准溶液和13C12-双
酚S标准溶液各0.10mL,分别置于10mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,混匀。将溶液转移至棕色玻
璃试剂瓶中,-18℃下避光保存,有效期为6个月。
3.4.5 同位素内标混合使用液(13C12-双酚A 和13C12-双酚F:100μg/L;13C12-双酚S:10μg/L):准确吸
取13C12-双酚A 和13C12-双酚F中间液各1.00mL、13C12-双酚S中间液0.10mL,置于10mL容量瓶中,
用甲醇-水溶液(40+60)定容至刻度,混匀。临用现配。
3.4.6 标准系列工作液:分别准确吸取标准混合使用液0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、0.80 mL、
1.00mL、2.00mL于10mL容量瓶中,加入0.50mL同位素内标混合使用液,用甲醇-水溶液(40+60)
定容至刻度,混匀。标准系列工作液中双酚A 和双酚F 的质量浓度分别为1.00μg/L、2.00μg/L、
5.00μg/L、8.00μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L,双酚S的质量浓度分别为0.100μg/L、0.200μg/L、
0.500μg/L、0.800μg/L、1.00μg/L、2.00μg/L,13C12-双酚A和13C12-双酚F的质量浓度为5.00μg/L,
13C12-双酚S的质量浓度为0.500μg/L。临用现配。
3.5 材料
3.5.1 双酚A、双酚F和双酚S复合免疫亲和柱:各化合物柱容量≥200ng,柱回收率≥90%(验证方法
参见附录A)。
注:对于不同批次的免疫亲和柱在使用前需进行质量验证。
3.5.2 聚丙烯离心管:2mL和50mL。
3.5.3 玻璃氮吹管:15mL。
4 仪器和设备
4.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪:配电喷雾离子源。
4.2 电子天平:感量为0.0001g和0.01g。
4.3 匀浆机。
4.4 高速粉碎机。
2
GB5009.305—2025
4.5 超声波振荡器。
4.6 涡旋混合器。
4.7 固相萃取装置(带真空泵)。
4.8 高速冷冻离心机:最高转速≥10000r/min。
4.9 氮吹仪。
4.10 pH 计:分度值为0.1单位。
5 分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 固态样品
5.1.1.1 干样:谷物等固态样品,取可食部分,经高速粉碎机粉碎均匀;乳粉、婴幼儿配方食品和婴幼儿
谷类辅助食品等粉状样品混合均匀。
5.1.1.2 鲜样:蔬菜、水果、肉及肉制品、蛋类、水产品等样品,取可食部分匀浆均匀。
5.1.2 液态样品:碳酸饮料超声10min充分排气;液态乳和非碳酸饮料直接摇匀。
5.1.3 半固态样品:发酵乳等半固态样品搅拌均匀。
5.2 试样提取
5.2.1 肉及肉制品、水产品、固态及半固态乳制品(乳粉、发酵乳等)、婴幼儿配方食品
称取1g试样(精确至0.01g),置于50mL聚丙烯离心管中,加入50μL同位素内标混合使用液,
振荡混合后静置30min。加入2mL水,涡旋振荡30s,再加入5mL乙腈涡旋混合。混合液超声提取
15min,4℃下10000r/min离心10min。取上清液置于玻璃氮吹管中,40 ℃下用氮气缓缓吹至约
2mL,加入8mLPBS混匀,待净化。
5.2.2 蛋、乳及液态乳制品
称取1g试样(精确至0.01g),置于50mL聚丙烯离心管中,加入50μL同位素内标混合使用液,振
荡混合后静置30 min。加入5 mL 乙腈,涡旋混合后超声提取15 min,4 ℃ 下10000r/min离心
10min。取上清液置于玻璃氮吹管中,40℃下用氮气缓缓吹至约2mL,加入8mLPBS混匀,待净化。
5.2.3 谷物及婴幼儿谷类辅助食品
称取1g试样(精确至0.01g),置于50mL聚丙烯离心管中,加入50μL同位素内标混合使用液,振
荡混合后静置30min。加入10mL 甲醇-水溶液(80+20),涡旋振荡30s,超声提取15min,4 ℃下
10000r/min离心10min。取上清液置于玻璃氮吹管中,40℃下用氮气缓缓吹至约2mL,加入8mL
PBS混匀,待净化。
5.2.4 蔬菜、水果
称取1g试样(精确至0.01g),置于50mL聚丙烯离心管中,加入100μL盐酸溶液(10+90)混匀,
再加入50μL 同位素内标混合使用液,振荡混合后静置30min。加入5mL乙腈,涡旋振荡30s,超声
提取15min,4℃下10000r/min离心10min。取上清液置于玻璃氮吹管中,40℃下用氮气缓缓吹至
约2mL,加入8mLPBS混匀,待净化。
3
GB5009.305—2025
5.2.5 饮料
称取1g试样(精确至0.01g),置于2mL聚丙烯离心管中,加入50μL同位素内标混合使用液,振
荡混合后静置30min。10000r/min离心10min。取上清液至50mL聚丙烯离心管中,加入10mL
PBS混匀,待净化。
注:澄清试样(如纯净水、矿泉水等)可不离心,直接加入PBS混匀。
5.3 试样净化
将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温,然后让柱内原有液体自然流尽。取5.2中试样提取液全
部过柱,自然流干,弃去全部流出液,再用10mL水淋洗免疫亲和柱。待水滴完后,用真空泵抽干免疫
亲和柱。加入1 mL 甲醇洗脱,收集洗脱液于玻璃氮吹管中,40 ℃下用氮气缓缓吹干。准确加入
0.40mL 甲醇,涡旋混合10s,再准确加入0.60mL 水,涡旋混合后转移至2 mL 聚丙烯离心管中,
10000r/min下离心5min,取上清液供液相色谱-串联质谱仪测定。
5.4 仪器参考条件
5.4.1 液相色谱参考条件
5.4.1.1 色谱柱:C18柱,100mm×2.1mm(内径),1.7μm(填料粒径),或相当者。
5.4.1.2 流动相:A 相为水,B相为甲醇。流动相梯度条件见表1。
5.4.1.3 流速:0.3mL/min。
5.4.1.4 柱温:40℃。
5.4.1.5 进样量:5μL。
表1 流动相梯度条件
时间
min
A相
%
B相
%
0 60 40
0.5 60 40
5.0 0 100
6.0 0 100
6.1 60 40
9.0 60 40
5.4.2 质谱参考条件
5.4.2.1 电离方式:电喷雾电离,负离子模式。
5.4.2.2 扫描方式:多反应监测(MRM)。
5.4.2.3 毛细管电压:2.0kV。<